Ukrywający się w ramach programu FBI ochrony świadków Rick Jarmin wpada w panikę, kiedy zostaje rozpoznany przez swoją byłą dziewczynę Marianne Graves. Ponadto gangster, który przez niego trafił do więzienia, zostaje zwolniony i wraca, aby się zemścić.
Gdy zapada noc, przewodnicy kończą pracę i idą do domu, a szkolne wycieczki kończą zwiedzanie, w waszyngtońskim Instytucie Smithsonian dzieje się coś niezwykłego. Nocny strażnik Larry Daley (w tej roli Ben Stiller) przeżyje największą przygodę swego życia. W drugiej części „Nocy...