Koniec XVI wieku. Do wybrzeży wyspy Roanoke przybywa statek z angielskimi kolonistami. Początkowo wszystko odbywa się zgodnie z planem. Przybysze stopniowo poszerzają swoje terytorium. W trakcie jednej z wypraw w okoliczne lasy budzą uśpione tam zło. Od tego momentu zaczynają ich nawiedzać...
FBI ma przetransportować, świadka koronnego na rozprawę sądową. Jadąc drogą nr 66, chcąc szybciej dojechać skręcają na tytułową trase 666, na której przed laty zostali zamordowani i zakopani pod drogą więźniowie. Teraz straceńcy wychodzą na ulice i zabijają każdego kto na niej...
